乳铁蛋白（Lactoferrin, LF）是转铁蛋白家族中的一种铁结合糖蛋白，乳铁蛋白存在于人体的乳汁和各种分泌液中，在母乳中含量最高，初乳中含量非常高的核心免疫功能蛋白。它能与病原微生物竞争铁源，抵御病原微生物侵袭，从而保护婴幼儿免疫损伤。
1939年，科学家从牛奶中分离出红色蛋白，但直到1961年人乳中的铁结合蛋白才被提取，至此乳铁蛋白才开始进入大众视野。随着研究的深入，科学家发现母乳和牛乳中的乳铁蛋白具有相似的生物活性，氨基酸序列同源性达到69%，但是牛乳中乳铁蛋白含量却显著低于母乳。随着生物科技的进步，全球乳企开始研发加速，将被誉为“免疫乳黄金"的乳铁蛋白应用于婴幼儿配方奶粉中，为婴儿的成长保驾护航。
GB5009.299-2024 食品安全国家标准 食品中乳铁蛋白的测定中明确规定了乳铁蛋白项目检测的基质，原理，前处理和分析耗材细节等。艾杰尔飞诺美 MDS实验室依据该标准，提供了完整的实验室检测方案。
▸称量：称取5g（精确至0.01g）试样于烧杯中，加标
▸提取：加入适量磷酸盐缓冲液Ⅱ提取，分次将样品转移至 25mL 容量瓶，用磷酸盐缓冲液Ⅱ 定容至刻度，充分混匀后转入离心管，在4 ℃条件下 10000r/min 离心 8min，取样液 10mL 待净化；
▸活化：肝素亲和柱使用前先将柱中保护液放掉，后加入 5.0mL 磷酸盐缓冲液Ⅱ活化；
▸上样：准确将 10.0mL样液过柱，控制流速在 1mL/min~3mL/min；
▸淋洗：用 10.0mL 磷酸盐缓冲液Ⅱ淋洗，弃去流出液，用吸水纸擦拭干净柱管内壁残留液体；
▸洗脱：5.0mL磷酸盐缓冲液Ⅰ洗脱，不要抽干；
▸浓缩：收集洗脱液并用磷酸盐缓冲液Ⅰ定容至 5.00mL，过0.45μm PES水相针头滤膜，上机待测。
▸色谱柱：Jupiter C4 4.6×250mm 5µm 300Å（00G-4167-E0）
▸流动相：A：0.1%三氟乙-酸水溶液；B：乙腈；
▸流 速：1.0 mL/min；
▸柱 温：30 ℃；
▸进样量：50 μL；
▸梯度程序见下表：
注意：
• 肝素亲和柱使用前要恢复至室温（25℃）。
• 在吸取带净化液时不要吸取上层脂质及下层沉淀，以免过柱时堵塞小柱。
• 标准用盐为无水磷酸氢二钠，水合盐用量需要进行换算。
本实验重现了GB5009.299-2024 食品安全国家标准 食品中乳铁蛋白的测定，使用肝素亲和柱结合液相色谱的检测方法对巴氏杀菌乳（巴氏奶）基质进行了乳铁蛋白的测试。样品经磷酸盐缓冲液Ⅱ提取后，肝素亲和柱（12mL，柱容量≥2mg；货号：PNBAC50020-12）净化，Jupiter C4,4.6×250mm 5μm 300Å (00G-4167-E0)液相色谱柱进行检测，采用外标法定量。结果表明，添加水平的相对回收率为96.95%，RSD1.5%，能够满足检测要求。
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食品标准更新速递 | 食品中乳铁蛋白的测定
更新时间：2025-07-18
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