寡核苷酸药物迭代不止，前处理平台如何一招应万变？

更新时间：2026-03-06

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过去十年，寡核苷酸药物的结构改性从未停止：从全磷硫化（PS）修饰ASO，到2'-OMe、2'-MOE修饰，再到如今大热的GalNAc-siRNA、脂质共轭siRNA…每一代新分子的出现，都在考验同一个问题：

你上一个项目的前处理方法，还能用在这个新分子上吗？

传统LLE + SPE(IPC)两步法的局限

目前许多实验室采用液液萃取（LLE）+ 离子对反相SPE处理体内寡核苷酸样品。流程看似成熟，但存在以下深层局限：

LLE溶剂操作挑战

LLE常用萃取溶剂（MTBE、乙酸乙酯、正己烷、1-氯丁烷乃至苯酚-氯仿体系）毒性强、气味大，对通风条件和操作规范要求高，高通量样品处理时实际操作挑战不容忽视。

两步操作，耗时耗力，误差叠加

LLE界面乳化、转移损失不可避免，SPE上样又是一次回收率关卡，两步误差叠加，批间CV难以压低，ICH M10合规压力大。

上样量大，基质干扰难以控制

当体内浓度低（ng/mL甚至pg/mL级），需大体积血浆上样（≥500 µL）。SPE对目标物的选择性不足，会造成基质效应过大，抑制目标药物信号。

选择性依赖离子对试剂，随改性漂移

SPE依赖TEA等外加试剂与磷酸骨架形成离子对，这一相互作用对分子结构高度敏感——链长、PS比例、GalNAc或脂质共轭改变，保留因子随之漂移，oligo药物变了，方法可能需重新优化。

OTX：机制不同，逻辑才真正不同

Clarity OTX采用混合模式阴离子交换（Mixed-Mode Anion Exchange）SPE填料，结合专有配方缓冲液体系，从保留机制上与传统反相SPE根本不同：

阴离子交换模式与寡核苷酸磷酸骨架产生特异性相互作用。磷酸骨架是所有寡核苷酸的共有结构特征，不随改性类型变化——这是一个稳定的选择性"锚点"，赋予OTX对不同改性分子的广谱适应性。
混合模式协同作用进一步提升基质净化能力，通过洗涤条件的灵活调节，可有效去除盐类、糖类、大分子蛋白及基因组DNA等内源性干扰，回收率稳定达80%以上。
单步SPE，无需前置LLE，流程缩短，误差来源减少。

更高的选择性意味着基质更干净、基线更低、信噪比更优，可显著缩减所需上样体积——这对珍贵的动物样品尤其重要。

Oligo药物的修饰变了，不需要推倒重建方法逻辑，只需在已有框架内微调洗涤条件。

飞诺美技术团队针对OTX在各种oligo药物的提取净化上已积累了丰富的经验。

多种寡核苷酸同时定量 / 小鼠肝脏

在同一OTX方法框架下，对Fomivirsen（全PS ASO）、Givosiran（已上市GalNAc-siRNA）及一种处于临床研究阶段的siRNA，共5条链进行同时提取与定量。

分析物	分子类型	肝脏回收率	RSD
Givosiran 正义链	GalNAc-siRNA	118.8%	5.7%
Givosiran 反义链	GalNAc-siRNA	105.9%	2.6%
研究siRNA 反义链	siRNA（临床研究阶段）	118.6%	4.0%
研究siRNA 正义链	siRNA（临床研究阶段）	118.6%	7.0%
Fomivirsen	全PS ASO	89.0%	1.0%

全部分析物回收率89-119%，RSD≤7%。

全PS修饰2'-MOE Gapmer /

CNS组织（脑+脊髓）

Clarity OTX（100 mg/well），Proteinase K预处理后，脑组织标准曲线accuracy 93-110%，CV<11%，LLOQ 1 ng/mL。图为添加内标后，目标oligo 在三个QC浓度下的总离子流色谱图，内标重现性和QC回收率均表现良好。

GalNAc-siRNA（Inclisiran）/

小鼠血浆 & 肝脏（高灵敏度方案）

采用Clarity OTX（100 mg/well）对Inclisiran进行小鼠血浆及肝脏样品提取，以Fomivirsen为内标，血浆LLOQ低至0.2 ng/mL，肝脏LLOQ低至1 ng/mL，较传统LLE+SPE方法灵敏度提升10-20倍，且不同操作人员间重现性良好，方法稳健性突出。（图为Inclisiran SS和AS链在小鼠血浆基质中的线性结果）

同一平台，血浆到脑组织，ASO到GalNAc-siRNA，单一分析物到多组分同时定量——方法框架不变，参数按需微调。

产品规格，覆盖不同需求

产品规格			适用场景
Clarity OTX 2 mg/well 96孔板			超低LLOQ，微洗脱富集
Clarity OTX 10 mg/well 96孔板			小体积血浆/血清体内PK研究
Clarity OTX 25/50/100 mg/well 96孔板			较大体积上样，血浆和组织提取
Clarity OTX 100/500 mg管式			方法开发，小批量样品

一对一技术支持

我们根据您的寡核苷酸结构（改性类型、链长、共轭系统）、目标浓度范围及生物基质类型，提供针对性的 Starting SOP，涵盖样品前处理、SPE条件优化、LC-MS参数建议，支持从方法开发到ICH M10合规验证全流程。