三篇应用齐发｜BioSep CEX短柱方案，解锁抗体与ADC电荷变异体分析

BioSep SCX 用于 8201 DAR8 ADC 分析，采用低 pH/高 pH 多组分缓冲液形成复合 pH 梯度，并加入 5% IPA，获得 8 个积分峰，其中两个主要组分面积占比分别为 30.29% 和 27.21%。

BioSep WCX 分别用于曲妥珠单抗和利妥昔单抗分析，均采用 100 mM MES（pH 5.78）与 NaCl 盐梯度，流速 0.8 mL/min，柱温 40 ℃，两个抗体样品均获得 6 个积分峰，实现主峰及酸性/碱性相关峰展开。

对于电荷变异体分析，短柱的价值不只是缩短运行时间，更在于快速判断样品是否具备可展开的电荷相关组分，并用于比较缓冲体系、盐梯度、pH 梯度或有机相添加条件。无论是抗体主峰与酸性/碱性峰的分布，还是 ADC 偶联后带来的复杂峰型，BioSep SCX/WCX 都可作为前期筛选和后续优化的起点。同时，稳定的填料性能与批次一致性有助于降低不同柱批之间的保留时间、峰型和相对峰面积波动，让方法开发、方法转移和长期使用更可控。

在 CEX方法开发中，SCX与 WCX的选择通常需要结合目标分子的 pI、表面电荷斑块、翻译后修饰和申报目标综合判断。SCX具有稳定的阳离子动力学，适合用于需要稳定重现的分析方法；WCX常用于区分大分子蛋白电荷斑块微小变化，可优先用于初步的方法探索。临床申报初期，可以通过与等电聚焦毛细管电泳图进行正交对比来选择不同的结合模式。

需要注意的是，CEX 图谱可用于建立电荷异质性指纹，但峰身份仍需结合正交手段确认。对于大分子蛋白样品，可在峰收集后进行，峰收集后进行完整分子或脱糖还原分子 LC-MS 和肽图分析以及ELISA进行正交比对；对于 ADC 样品，建议多一步HIC 确认峰组分和DAR以及偶联位点之间的关系。这些都是BLA申报不可少的环节。