从AOC到LOC、POC： Clarity OTX如何应对核酸偶联药物的前处理挑战

更新时间：2026-10-24

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将寡核苷酸与抗体、脂质或多肽偶联，可以改善药物的靶向递送、组织分布或细胞摄取，也会改变目标物的分子量、疏水性、空间结构及其与生物基质的相互作用。

对于生物分析人员而言，新的偶联形式意味着新的样品前处理挑战：既要减少蛋白、磷脂、盐及其他内源性物质的干扰，又要避免低浓度目标物在提取过程中的损失。

AOC、LOC和POC的偶联载体不同，但都保留了带有多重负电荷的寡核苷酸链段。

AOC：极低浓度free oligo检测

AOC的⽣物分析通常围绕三类分析物展开：总抗体（total antibody）、偶联寡核苷酸（conjugated oligonucleotide）和游离寡核苷酸（free oligonucleotide）。三者结合，才能从抗体暴露、连接稳定性和药物释放等⻆度理解AOC的体内⾏为。

SCIEX联合Phenomenex最新发布的技术⽂档显示，在同⼀台⾼分辨质谱上建⽴了这三条分析路径。其中，游离寡核苷酸的前处理采⽤Clarity OTX固相萃取。

为什么free oligo更需要选择性前处理？

血浆中的free oligo通常处于较低浓度。前处理不仅要尽可能保留目标物，还需要充分降低蛋白、磷脂、盐及其他共提取物带来的基质背景。

传统液液萃取能够去除部分蛋白和疏水性杂质，但对于高亲水、带多重负电荷的寡核苷酸，其选择性净化能力可能有限。当目标物接近定量限-时，残留基质引起的离子抑制、背景干扰和响应波动，可能成为进一步降低LOQ的限制。

对于低水平free oligo，前处理的关键不只是“提取出来"，更是选择性净化与富集。

OTX前处理流程

裂解与稀释

50 μL⼤⿏⾎浆 + 内标，加⼊裂解缓冲液涡旋；再⽤醋酸铵缓冲液（pH 5.5）稀释⾄300 μL

上样

加载到已活化、平衡的OTX 96孔板

淋洗

先⽤缓冲液淋洗，再⽤缓冲液/⼄腈（4:1）淋洗，去除基质⼲扰

洗脱

碱性缓冲液（pH 9.5，含TCEP）/⼄腈/四氢-呋喃 = 50:40:10

氮吹复溶

吹至近干，⽤100 μL TE缓冲液复溶

LC-HRMS分析

结果：⼲净的空⽩，清晰的LLOQ峰

在优化后的流程下，空⽩基质在⽬标物保留时间处没有明显⼲扰；0.02 ng/mL（LOD）已能看到清晰峰形，0.05 ng/mL（LLOQ）的峰更为明确。

OTX通过选择性保留、淋洗和集中洗脱，为降低基质背景、改善信噪比及支持低水平定量提供前处理基础。

LOC与POC：进一步拓展OTX的应用边界

除了AOC中的free oligo，核酸与脂质或多肽偶联后，目标物的疏水性、整体电荷和基质相互作用会进一步变化。OTX仍可从核酸部分的共同电荷特征出发，为LOC和POC提供选择性富集与净化的开发路径。

LOC｜应对脂质端带来的复杂分配

LOC同时包含亲水、带负电荷的核酸链和疏水脂质端，呈现明显的两亲性。在液液萃取过程中，目标物可能分布于水相、有机相或两相界面，从而带来提取损失和回收波动。

应用结果

实验室采用Clarity OTX对一个典型LOC药物开展了生物样品前处理评估，覆盖血浆、以及小鼠肝脏、肌肉、皮肤等组织匀浆。经过对酶解和OTX步骤进行优化，biozen widepore C4色谱柱进行液质的分离，各基质中的提取回收率在87%~101%，重复性RSD< 5%。结果表明，OTX能够在不同生物基质中稳定富集该LOC，并为后续LC-MS定量提供比较干净的样品。

Clarity OTX从核酸链的多重负电荷出发，对目标物进行选择性保留。通过调整预处理、淋洗和洗脱条件，可建立不全依赖两相分配的富集与净化路径。

POC｜减少复杂结构带来的提取损失

POC的前处理行为可能受到多肽序列、长度、净电荷和疏水性的共同影响。即使核酸链相似，不同POC也可能表现出不同的两相分配和非特异性吸附行为。