Gemini宽pH液相色谱柱的核心在于其固定相和流动相的协同作用。固定相是涂覆在色谱柱内壁上的一层具有指定化学性质的物质,它能够与流动相中的物质发生多种相互作用,从而实现分离。
当样品溶液随着流动相进入色谱柱时,不同的组分在固定相和流动相之间的分配系数不同。分配系数是指组分在固定相和流动相中的浓度之比。那些与固定相亲和力强的组分,在固定相中停留的时间较长,而在流动相中移动较慢;相反,与固定相亲和力弱的组分,在流动相中移动较快。
例如,在正相色谱中,固定相通常是极性的,如硅胶等。而流动相是非极性或弱极性的溶剂。极性较强的样品组分会与固定相发生较强的相互作用,如氢键、偶极 -偶极相互作用等,从而在固定相中保留时间较长。而非极性或弱极性的组分则更容易随着流动相快速通过色谱柱。
在反相色谱中,情况则相反。固定相是非极性的,如十八烷基硅烷键合硅胶(C18),流动相是极性溶剂。此时,非极性或弱极性的样品组分与固定相有较强的疏水相互作用,保留时间较长,而极性较强的组分则更倾向于留在流动相中,快速流出色谱柱。
Gemini宽pH液相色谱柱的测定步骤:
1.安装与平衡:
-将色谱柱正确安装到液相色谱仪上,确保连接紧密,无泄漏。
-选择合适的流动相,通常根据样品的性质和分析目的来选择,如甲醇、乙腈、水等,以及相应的添加剂(如缓冲盐等)。
-用选定的流动相冲洗色谱柱,进行平衡处理,一般冲洗时间为20-30分钟,以确保色谱柱达到稳定的工作状态。
2.进样与分离:
-将预处理好的样品通过进样器注入到色谱柱中。
-设置合适的流速和检测波长,开始色谱分离过程。
-根据样品的性质和分析目的,可能需要调整流动相的组成或梯度程序,以实现分离效果。
3.检测与数据分析:
-使用检测器检测分离出的化合物,并根据检测结果进行数据分析和处理。
-可以观察物质的保留时间、峰形对称性、峰分离度、峰面积变化以及理论板数等指标来评估色谱柱的性能。