红酒中八种合成着色剂检测

更新时间：2012-07-09

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一、样品信息

样品组分	结构式
柠檬黄
新红
苋菜红
靛蓝
胭脂红
日落黄
诱惑红
亮蓝

二．实验目的

参照《食品中合成着色剂的测定》（GB/T5009.35-2003），建立红酒中的合成着色剂的SPE-HPLC检测方法。

三．实验方法

3.1实验试剂

l 乙酸；

l 甲醇；

l 乙酸铵溶液（0.02mol/L）：称取1.54g乙酸铵，加水溶解并稀释至1000mL；

l 氨水溶液：量取氨水2mL，加水至100mL，混匀；

l 甲醇/甲酸（6+4）溶液：量取甲醇60mL，甲酸40mL，混匀；

l 柠檬酸溶液：称取20g柠檬酸，加水至100mL溶解，混匀；

l 无水乙醇-氨水溶液-水：量取无水乙醇70mL，氨水溶液20mL、水10mL，混匀；

l 水（PH=6.0）：水加柠檬酸溶液调节PH=6.0；

l 水（PH=4.0）：水加柠檬酸溶液调节PH=4.0；

l 水：超纯水

l 合成着色剂储备液：每1.0mL中含柠檬黄、新红、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、亮蓝各0.5mg，诱惑红0.1mg的水溶液；

l 合成着色剂使用液：上述合成着色剂储备液逐级稀释成每1.0mL中含柠檬黄、新红、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、亮蓝各5μg，诱惑红1μg的水溶液；

l Cleanert^® JXA SPE小柱：规格为1g/6mL，使用前经5mL甲醇和5mL pH=6.0的水活化。

3.2.实验耗材

名称	规格	订货号
Venusil^® XBP C18	5μm，100A，4.6*150mm	VX951505-0
保护柱芯	4.6*10mm，4/pk	VX950105-0
保护柱套	适用于4.6*10mm的保护柱芯	CH-100
Cleanert^® JXA	1g/6mL，30/盒	JXA0006
Hydrophilic PTFE	0.45μm，13mm，100/包	AS081345

3.3.试样处理

取试样（某品牌红酒）20mL,加入合成着色剂混标溶液1.0mL，混匀，用10%氨水调节PH约6.0，将全部试样经过Cleanert^® JXA柱，分别用水（PH=4.0）、甲醇/加酸（6+4）溶液6mL淋洗，再用10mL水淋洗，用乙醇-氨水溶液-水（7+2+1）6ml洗脱，收集洗脱液于50℃水浴蒸发至干，加水定容至1.0mL，经0.45μm滤膜过滤，待测。

3.4液相色谱条件

色谱柱：Venusil^® XBP C18，5μm；4.6*150mm；

流动相：A：0.02mol/L的乙酸铵溶液（乙酸调节pH=4）；

B：甲醇

流速：1.0mL/min；

进样量：20μL；

波长：254nm；

梯度：

时间	A%	B%
0	95	5
10	80	20
18	40	60
25	40	60
25.01	95	5
40	95	5

四．实验结果

表1.添加5ppm混标峰面积数据

样品组分	标品	标样过柱1	标样过柱2	红酒样品1	红酒样品2
柠檬黄	318	320	315	294	324
新红	471	474	461	482	473
苋菜红	266	269	262	277	279
靛蓝	314	282	279	273	275
胭脂红	266	267	263	246	240
日落黄	234	238	234	210	212
诱惑红	33	33	33	35	34
亮蓝	39	40	39	37	37

表2.添加5ppm混标回收率数据

样品组分	标样过柱1（%）	标样过柱2（%）	红酒样品1（%）	红酒样品2（%）
柠檬黄	100.6	99	92.5	102
新红	100.6	97.8	102	100
苋菜红	101	98.5	104	105
靛蓝	89.8	88.8	86.9	87.5
胭脂红	100.3	98.8	92.5	90.2
日落黄	101	100	90	90.6
诱惑红	100	100	106	103
亮蓝	102	100	95	95

五、实验结论

实验结果表明，Cleanert^® JXA小柱和Venusil^® XBP C18液相色谱柱可以用于红酒中的合成着色剂的检测，该方法快速、准确。

六、注意事项

l 红酒样品呈弱酸性，在上样之前要将其pH值调节至6左右，保证小柱可对合成着色剂有良好地吸附；

l 若样品酒精度过高，建议在上样前对样品进行除醇处理；

l SPE小柱净化过程中，要注意对流速的控制，建议控制在1mL/min左右；

l 洗脱液氮吹复溶后，应选用水系滤膜过滤，防止因滤膜吸附造成样品的损失，建议选用Agela Hydrophilic PTFE滤头。

附录：

图1 5ppm混标溶液

图2 5ppm混标过柱1

图3 5ppm混标过柱2

图4 红酒空白图谱

图5 5ppm基质加标1

图6 5ppm基质加标2

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