黄酒中氨基甲酸乙酯含量检测-20g样品

更新时间：2012-07-09

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1 仪器及材料

仪器：Agilent GC-MS 7890-5975c；涡旋混合器；旋转蒸发仪；

玻璃器皿：30mL样品瓶；200mL鸡心瓶；容量瓶；进样样品瓶；

材料及试剂：氨基甲酸乙酯净化柱；氨基甲酸乙酯标准品；PTFE滤膜；二氯甲烷、甲醇均为色谱纯；无水硫酸钠（经600度煅烧）；

2 标准溶液配制

准确称取约0.1g（至0.0001g）氨基甲酸乙酯标准品于100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得到标准储备液。用甲醇逐级稀释储备液，得到20、10、5、1、0.1、0.05（单位为μg/mL）标准溶液，用于绘制标准曲线。同时稀释得到标准工作液4μg/mL、40μg/mL、400μg/mL，用于进行加标回收率实验。

3 GC-MS操作条件

3.1 GC条件

毛细柱DA-INOWAX（30m*0.25mm*0.25um）；进样口温度230℃；载气：高纯氦气；流速1ml/min；程序升温：60℃（5min）3.5℃/min 150；不分流进样，进样量1μL。

3.2 MS条件

接口温度：240℃，电离方式：EI，电子能量：70eV，离子源温度：230℃，四级杆温度：150℃；扫描模式：SIM模式，监测离子：62,74,89，其中定量离子为62.

4 样品处理

4.1 黄酒加标样品

称取20g黄酒于30mL样品瓶中，加入标准工作液0.1mL，涡旋混合均匀，将样品载入到净化柱上，静置10min以保证黄酒样品和填料充分湿润。用3*40mL二氯甲烷洗脱，每次间隔1-3min，用鸡心瓶收集洗脱液，将洗脱液在40℃下旋转蒸发至约1mL，转移溶液至带刻度试管中，用2*1mL甲醇洗涤鸡心瓶，将洗涤液也转移至试管中进行合并，并用甲醇定容至4mL，加入少量无水硫酸钠，静置5min，用PTFE滤膜进行过滤，收集，取少量入进样样品瓶，待测。

4.2 黄酒样品

量取20g黄酒，将样品载入到净化柱上，往下操作步骤同4.1（将样品载入到净化柱上，静置……）。

4.3 空白样品

量取20g去离子水，将样品载入到净化柱上，往下操作步骤同4.1（将样品载入到净化柱上，静置……）。

5 实验结果

色谱图

将处理得到的样品在仪器条件（3）下进行检测，得到的色谱图如图1~图3.

图1 标准溶液色谱图（浓度为1μg/mL）

图2 黄酒样品加标色谱图（定容浓度为1μg/mL）

图3 黄酒样品色谱图

标准曲线

将步骤（2）配制的标准溶液，在仪器条件（3）下进行检测，绘制标准曲线，得到线性方程为y=2.19e+005*x+4.40e+003（相关系数为0.999），其中y为峰面积，x为目标物浓度（μg/mL），方法检出限为3ng/mL，定量限为10ng/mL

加标回收率及精密度

称取17份20g酒样，其中5份分别加入浓度为4μg/mL标准工作液0.1mL，5份分别加入浓度为40μg/mL标准工作液0.1mL，另外5份分别加入浓度为400μg/mL标准工作液0.1mL，余下2份酒样作为空白，在条件（4）下进行样品处理，将得到的样品在仪器条件（3）下进行检测，结果如表1所示。

表1 加标回收率及精密度

加标浓度/μg/mL		NO.2	NO.3	NO.4	NO.5	平均回收率	RSD（n=5）
0.02	87.20%	96.70%	110.50%	90.70%	95.20%	96.06%	9.27%
0.2	99.20%	91.10%	89.40%	88.10%	97.20%	93.00%	5.29%
2	88.80%	89.10%	90.30%	95.70%	86.50%	90.08%	3.81%

计算公式

样品中氨基甲酸乙酯的含量（X）以mg/kg表示，按式（1）计算：

X=（C1-C2）*V/m…………………………..（1）

式中：

C1为试样中氨基甲酸乙酯的含量，单位为μg/mL；

C2为空白试样氨基甲酸乙酯的含量，单位为μg/mL；

V为试样zui终定容体积，单位为mL；

m为称取试样的质量，单位为g。

6 结论

实验结果表明，该净化柱对氨基甲酸乙酯能有较好的回收率，同时，使用该净化柱能较好的去除酒中的氨基酸、蛋白质、糖、有机酸等干扰成分。该方法黄酒用量为20g，洗脱剂用量为120mL，对氨基甲酸乙酯含量较低的酒样能有较高的富集倍数，该方法实验操作快速、简便，可应用于大批量样品的前处理。

附录一

实验中所用耗材订货号见表2

表2 耗材及订货号

耗材	货号
氨基甲酸乙酯净化柱	EC2000060
30mL样品瓶	2409-0839
进样样品瓶	1109-0259
PTFE滤膜	AM041320
DA-INOWAX	2025-3002

附录二

针对氨基甲酸乙酯含量较高的样品，可以减少取样量，具体方法如下：

称取2g黄酒于10mL样品瓶中，加入标准工作液50μL，涡旋混合均匀，将样品载入到净化柱上，静置10min以保证黄酒样品和填料充分湿润。然后用12mL二氯甲烷洗脱，用流速调节阀控制流速为2 mL/min左右，用带刻度试管收集洗脱液，将洗脱液在30℃下氮吹至1mL（若体积小于1mL可以用二氯甲烷定容至1mL），加入少量无水硫酸钠，静置5min，用PTFE滤膜进行过滤，收集，取少量入进样样品瓶，待测。

对应于2g样品的净化柱的货号为：EC20006

其他测试方法同20g取样量的方法。完整方法链接请点击这里。