解锁纳米抗体分析新范式！Phenomenex SEC平台方法助力高通量分离

更新时间：2025-10-10

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在生物医药技术迭代浪潮中，纳米抗体凭借 “小而强" 的独特优势，已成为抗体药物、诊断试剂、工业酶工程等领域的 “明星分子"。与传统完整抗体（IgG，约 150 kDa）相比，纳米抗体的分子特性与功能优势均展现出特殊潜力，其深度技术价值值得深入拆解。

从分子结构来看，纳米抗体是骆驼科动物（骆驼、羊驼等）或软骨鱼体内天然缺失轻链的抗体片段，核心功能区仅为重链可变区（VHH），分子量覆盖12-15 kDa（经典 VHH）至25-35 kDa（多结构域融合型，如 VHH-Fc 融合体、双特异性 VHH 等）。

这种 “精简结构" 带来了多重不可替代的优势：

一

组织穿透性强

纳米抗体的体积仅为传统抗体的 1/10，能穿透血脑屏障、肿瘤间质等致密生物屏障，甚至进入细胞内靶向胞内抗原，这是传统抗体难以实现的突破；

二

稳定性碾压常规抗体

其框架区（FR）存在独特的二硫键和疏水氨基酸残基，可在-80℃至 60℃温度范围内保持活性，耐受 pH 2-11 的环境，且在蛋白酶（如胃蛋白酶、胰蛋白酶）作用下不易降解，极大拓展了口服给药、局部外用等应用场景；

三

功能可塑性高

通过基因工程改造，可构建双 / 多特异性纳米抗体（靶向多个抗原表位）、抗体药物偶联物（ADC）、酶 - 抗体融合蛋白等，还能与荧光素、放射性核素等标记物高效结合，兼顾诊断与治疗功能；

四

生产成本优势显著

可在大肠杆菌、酵母等原核 / 真核系统中高效表达，表达量可达传统抗体的 3-5 倍，且纯化工艺简单，大幅降低工业化生产门槛。

然而，纳米抗体的研发与生产中，精准表征是质量控制的核心难题。由于分子量大范围覆盖 12-35 kDa，且易形成二聚体、多聚体（尤其是高浓度制备时），或在储存过程中发生降解，需通过可靠的分析技术评估纯度、聚集体含量等关键指标。尺寸排阻色谱（SEC）作为分离效率高、重复性好的分析手段，成为纳米抗体表征的 “黄金标准"—— 而 Phenomenex 推出的纳米抗体SEC平台方法，正是针对这一需求的定制化解决方案。

为验证该平台方法的性能，我们以优化后的色谱条件为基础，对8个纳米抗体样品进行了分析，实验数据充分彰显其平台化的技术优势。色谱柱选用Biozen 1.8um dSEC-2（4.6*150mm），这款生物惰性色谱柱具有独特的固定相结构，能实现高分辨率高通量的效果；流动相为200mM PB(k)+250mM KCl (PH6.6)+5% ACN，可有效减少非特异性吸附；流速设定为0.35mL/min，柱温控制在30℃。

在8个纳米抗体样品的分析中（详见附图），所有样品均实现了有效分离，能有效区分纳米抗体及其可能存在的微量聚集体或降解产物。从峰形参数来看，多数样品的主峰峰形对称，不对称度接近1.0，符合高质量色谱分析的要求。同时，每一针的分析时间都能控制在八分钟以内，精准匹配高通量筛选的需求。这些结果表明，使用Biozen dSEC-2搭建的纳米抗体SEC平台方法不仅能精准定量目标纳米抗体，还能灵敏地检测出样品中的杂质，为纳米抗体的质量控制提供更加高效全面的支持。

样品1 VHH 分子量13.15KD

样品2 AbFragment/VHH-FC 分子量79.34KD

样品3 AbFragment/VHH-FC 分子量79.68KD

样品4 AbFragment/VHH-FC 分子量80.62KD

样品5 AbFragment/VHH 分子量15.57KD

样品6 AbFragment/VHH 分子量14.47KD

样品7 VHH 分子量13.35KD

样品8 AbFragment/VHH-FC 分子量75.84KD

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