白酒中16种邻苯二甲酸酯类物质检测整体解决方案-GC/MS法、HPLC法

更新时间：2012-11-22

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一、实验目的

建立白酒中塑化剂的前处理和检测方法，使用Cleanert DEHP（500mg/6mL，玻璃柱）富集白酒这类极性基质中的邻苯二甲酸酯类物质，建立固相萃取方法，以期得到优良的加标回收率，保证检测结果的准确性。

二、仪器及材料

材料：白酒；纯化水,16种邻苯二甲酸酯（PAEs）混标1ppm；Cleanert DEHP（500mg/6mL，玻璃柱管）；玻璃移液管；洗耳球；烧杯

仪器：Agilent GC/MS 7890-5075c，Agilent HPLC1200，氮吹仪

三、实验过程

注意事项：实验过程中，试剂及容器必须为玻璃，尽量避免接触塑料制品。

甲醇和乙酸乙酯必须是进口色谱纯。

3.1 溶液配制

（1）将白酒用去离子水稀释，使其中的乙醇的含量为5%。

例如：某种白酒含酒精52%，那么取9.6mL白酒，用去离子水稀释定容至100mL，即可得5%的酒精含量的样品液。

（2）取1mL甲醇加入19mL去离子水，混匀，得到5%甲醇水溶液，为淋洗液。

3.2 固相萃取

活化：用玻璃移液管分别取5mL乙酸乙酯、5mL甲醇，5mL水，在重力状态下依次过柱；

上样：用玻璃移液管取100mL样品液加到柱上；

淋洗：用玻璃移液管取5mL 5%甲醇/水溶液淋洗固相萃取柱。

淋洗结束之后，开启真空泵，抽20min，抽干之后，加入2mL甲醇浸泡柱床约1min；

洗脱：用10mL乙酸乙酯洗脱固相萃取柱，收集洗脱液。

将洗脱液分别于35℃氮吹至干，用1mL甲醇定容，将溶液转移至进样样品瓶，进行GC/MS或HPLC检测，具体检测方法参见附录1及附录2。

四、实验结果及结果分析

取2份10mL含5%酒精的白酒样品溶液，各加入1ppm邻苯二甲酸酯类混标100μL，按照上述方法进行操作和GC/MS检测，得到的色谱图见图1，回收率数据见表1.

4.1 实验谱图

图1加标样品洗脱液色谱图（定容浓度为100ppb）

4.2 实验数据

表1 回收率数据

化合物	保留时间/min	样品1	样品2
邻苯二甲酸二甲酯	8.258	139.38%	122.06%
邻苯二甲酸二乙酯	9.128	121.19%	138.34%
邻苯二甲酸二异丁酯	10.889	171.77%	159.59%
邻苯二甲酸二丁酯	11.637	176.37%	137.97%
邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯	11.97	131.02%	99.47%
邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯	12.728	97.79%	83.94%
邻苯二甲酸二（2-乙氧基）乙酯	13.051	130.83%	102.72%
邻苯二甲酸二戊酯	13.418	105.87%	66.29%
邻苯二甲酸二己酯	15.568	87.54%	62.29%
邻苯二甲酸丁基苄基酯	15.726	129.39%	95.98%
邻苯二甲酸二（2-丁氧基）乙酯	17.169	164.31%	125.40%
邻苯二甲酸二环己酯	17.843	111.14%	86.31%
邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯	18.073	105.94%	89.61%
邻苯二甲酸二苯酯	18.207	170.57%	117.68%
邻苯二甲酸二正辛酯	20.481	123.82%	99.88%
邻苯二甲酸二壬酯	23.023	121.05%	97.86%

注意：邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二乙酯、邻苯二甲酸二异丁酯、邻苯二甲酸二丁酯是使用非常普遍的增塑剂，广泛的存在于环境中，因而测试时十分容易造成背景过高的干扰问题。尤其需要注意的是氮吹时，使用的氮吹仪，应该是的仪器，而且必须定期用进口色谱纯的乙酸乙酯清洗氮吹的针头。

附录1 GC/MS法检测16种邻苯二甲酸酯类化合物

仪器：Agilent 7890/5975c GC/MS

色谱条件：

色谱柱：DA-5MS（30m*0.25mm*0.25μm）（订货号：1525-3002）；

进样口：250℃，不分流进样；

进样量：1μL；

程序升温：50℃（1min）20℃/min 220℃（1min）5℃/min 280℃（4min）；

流速：1 mL/min。

质谱条件：

接口温度：280℃；

电离方式：EI；

电离能量：70eV；

溶剂延迟：7min；

监测方式：SIM模式，监测离子见表2。

表2 16种邻苯二甲酸酯类化合物定量离子及定性离子

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定性离子
1	8.258	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.128	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	10.889	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.637	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	11.97	邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.728	邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯	BMPP	149	251
7	13.051	邻苯二甲酸二（2-乙氧基）乙酯	DEEP	45	72
8	13.418	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.568	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.726	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.169	邻苯二甲酸二（2-丁氧基）乙酯	DBEP	149	223
12	17.843	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.073	邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯	DEHP	149	167
14	18.207	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.481	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.023	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

图2 100ppb标样色谱图

表3 16种邻苯二甲酸酯类化合物GC/MS检测标准曲线表

峰序号	简称	标准曲线方程	R²
1	DMP	y = 63.4 * x + 444	1
2	DEP	y = 62.1 * x + 317	1
3	DIBP	y = 98.8e * x + 3230	1
4	DBP	y = 115 * x + 1400	1
5	DMEP	y = 32.2 * x + 398	0.999
6	BMPP	y = 25 * x + 45.2	1
7	DEEP	y = 14.6 * x + 305	0.995
8	DPP	y = 105 * x + 786	1
9	DHXP	y = 110 * x - 90.2	1
10	BBP	y = 45.9 * x + 3050	0.997
11	DBEP	y = 16.7 * x + 11.3	1
12	DCHP	y = 74 * x + 198	1
13	DEHP	y = 61 * x + 2050	1
14	—	y = 41.6 * x + 438	1
15	DNOP	y = 92.8 * x + 259	1
16	DNP	y = 78.7 * x + 800	0.999

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离16种邻苯二甲酸酯类物质，*16种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有16种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。

附件2 HPLC法检测16种邻苯二甲酸酯类化合物

色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L）

流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50

表4 梯度洗脱表

Time/min	A/%	B/%
0	60	40
2	50	50
10	40	60
12	30	70
20	30	70
31	0	100
40	0	100
40.01	60	40

流速：1.0 mL/min

波长：242 nm

进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm）

样品：16种邻苯二甲酸酯

浓度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A）

溶剂：正己烷 /40%流动相A

柱温：30℃

图3 16种邻苯二甲酸酯标准品HPLC色谱图（样品浓度：25ppm）

（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DNOP，邻苯二甲酸二苯酯，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP）

表5 16种邻苯二甲酸酯类化合物HPLC检测标准曲线表

峰位置	简称	标准曲线方程	R²
1	DMP	Y=24.99X+5.202	0.999
2	DEP	Y=17.84X+3.424	0.999
3	DBP	Y=24.21X+3.974	0.999
4	DNOP	Y=14.03X+3.658	0.998
5	邻苯二甲酸二苯酯	Y=24.21X+3.974	0.999
6	BBP	Y=17.51X+4.972	0.997
7	DEHP	Y=17.22X+4.098	0.999
8	DMEP	Y=18.67X-0.302	0.997
9	DBEP	Y=12.66X-1.877	0.998
10	DPP	Y=14.38X+0.445	0.997
11	BMPP	Y=15.35X+0.798	0.998
12	DEEP	Y=11.46X+3.475	0.998
13	DCHP	Y=13.52X+2.67	0.998
14	DIBP	Y=9.915X+26.59	0.996
15	DNP	Y=10.61X-0.041	0.999
16	DINP	Y=9.404X+11.14	0.999

结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离16种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，*LC检测16种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有16种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。