色谱分析实战馆｜硅胶小柱填料怎么分层了？

某一客户采购SI5006小柱，第一次使用，用于极性脂肪和中性脂肪的分离，用的溶剂是二氯甲烷和甲醇，投诉小柱填料分层，

（1）活化：正己烷，然后400uL二氯甲烷溶剂溶解样品，上样会分层，比较小；

（2）活化：二氯甲烷， 一共15mL，5mL、5mL分批加入， 6-10mL分层特别明显，但是再加入甲醇后，又会复原。

可以看到，活化加入二氯甲烷溶剂时，填料有类似“分层"现象，但是将溶剂挤干吹干，小柱又恢复了白色。 验证看下来，与客户端表现一致。

那么，我们来分析一下，为什么将二氯甲烷加入硅胶小柱时，会有填料“消失"或者“分层"现象呢？

二氯甲烷的折光率为nD(20)=1.424，硅胶的折光率一般在1.41~1.53之间，因孔隙含空气，孔隙越高整体表观折光率轻微下降（1.41~1.46 区间浮动）。

折光率是指光线在空气中进行的速度与在样品中进行速度的比值，是有机化合物重要的物理常数。二氯甲烷填充并润湿了硅胶孔道，使其折光率与硅胶接近而暂时变透明；溶剂压出后孔道重新进空气，光散射增强，所以又恢复白色，这是正常的物理现象。

因此，与硅胶折光率近似的溶剂，基本都会有这种现象，下面列出了常用溶剂的折光率数据。

加了二氯甲烷、二氯甲烷、苯、甲苯的硅胶小柱有透明现象产生，而加了正己烷、乙酸乙酯、甲醇、丙酮的硅胶小柱就不明显。原来折光率与硅胶接近的溶剂确实可以出现透明现象。

（1）硅胶小柱遇到二氯甲烷溶剂变“透明"或“分层"现象是因为两者的折光率接近，选择其他折光率相似的溶剂硅胶小柱也会有类似现象；

（2）如果你在使用硅胶小柱过程中也遇到了类似的现象，不用担心，硅胶小柱是可以正常使用的，对实验结果没有影响~