干货分享|色谱柱柱压过高时的安全排查步骤

　　色谱柱柱压过高是液相色谱(HPLC/UHPLC)分析中常见的问题，可能由流动相、系统堵塞、色谱柱污染或仪器故障引起。平时我们在实验室进行液相色谱的分析测试时，如果突然遇到色谱柱柱压过高，需要怎么做？
 

　　01立即采取的安全措施
 

　　停止运行仪器
 

　　关闭泵和检测器，避免持续高压损坏系统。
 

　　佩戴防护装备
 

　　处理高压系统时需戴护目镜和手套，防止液体喷溅。
 

　　02逐步排查原因及解决方法
 

　　柱压过高的核心排查逻辑：从外到内，由简到繁。优先排除流动相、过滤器和保护柱等外部因素，再逐步深入检查仪器部件和色谱柱。定期维护和规范操作是预防高压问题的关键。
 

　　流动相
 

　　◆有无充分脱气？
 

　　观察流动相瓶里是否有很多气泡，气泡堵塞滤头会导致压力升高，可重新超声流动相或者重新配置流动相。
 

　　◆流动相是否澄清？是否分层？或者有颗粒物析出？
 

　　建议流动相使用前用滤膜过滤，一般使用0.22μm滤膜过滤有机相，0.45μm滤膜过滤水相或缓冲盐，防止有盐的颗粒堵塞管线或者色谱柱导致压力升高。如看到流动相浑浊或分层，需重新配置。
 

　　如果有盐溶液，超纯水溶解缓冲盐后，再加入有机相，加入后，需拧紧瓶盖，大力摇匀，仅仅超声是不够的，需要做到充分混匀，防止水相和有机相未混匀导致的出峰异常或不出峰情况。
 

　　断开色谱柱，排查仪器压力
 

　　◆卸下色谱柱，用两通接头连接泵与检测器，以纯甲醇/乙腈(低黏度)运行系统。
 

　　◆正常压力：<5 MPa(不同仪器基线值可能略有差异)
 

　　◆高压持续：说明泵、混合器、管路或检测器堵塞，需分段检查。
 

　　连接保护柱
 

　　◆若系统压力正常，依次连接保护柱、色谱柱，判断压力升高的来源。
 

　　◆保护柱压力高：更换保护柱柱芯，若更换了保护柱柱芯压力仍高，说明是保护柱柱套堵了，需更换新的柱套；保护柱压力不高，色谱柱压力高，说明是色谱柱导致的系统压力高，再进一步排查。
 

　　色谱柱部分
 

　　◆首先需要检查色谱柱的规格，例如长度、内径、填料粒径这些参数，如果粒径较小且内径较小，需注意此类型色谱柱本身压力就会偏高一些，如果遇到仪器超压报警，关注是否是仪器耐压上限低导致的。(ps：各个系列色谱柱维护指南、典型压力及压力上限可在艾杰尔飞诺美公众号自主查询)
 

　　◆新柱启用，如果流动相起始比例是高比例的盐溶液(例90%磷酸二氢钾缓冲盐：10%乙腈)，需先用同比例的乙腈水(例90%水：10%乙腈)过渡，防止高比例有机相立马转换到高比例盐溶液造成的盐析现象。
 

　　◆色谱柱使用一段时间后导致的压力升高：如果柱压缓慢升高，且伴随峰形展宽或分叉，柱效明显下降----筛板或柱头堵塞；如果柱压骤升-----填料塌陷。
 

　　一般建议反向冲洗色谱柱，使用适当溶剂梯度冲洗，严重污染时，可尝试强溶剂冲洗；填料塌陷需更换色谱柱；也可反接色谱柱使用看压力是否符合要求。(具体的冲洗流程各个色谱柱不尽相同，可在艾杰尔飞诺美公众号自主查询)
 

　　03其他可能原因
 

　　温度异常
 

　　◆柱温过低导致流动相黏度升高，压力升高，适当提高柱温(需参考方法要求及色谱柱耐温上限要求)。
 

　　◆温控模块故障需检修。
 

　　流速设置错误
 

　　检查方法中流速是否超出色谱柱耐受范围(如常规液相色谱柱通常≤1.5 mL/min)。
 

　　样品残留
 

　　未过滤样品(0.22μm滤膜)或高浓度样品导致柱头污染，需加强样品前处理。
 

　　04预防措施及日常维护
 

　　1、使用合适的保护柱，定期更换保护柱柱芯。
 

　　2、缓冲盐流动相，色谱柱活化需先用高比例水相过渡，避免盐析现象。
 

　　3、色谱柱冲洗及保存：常规反相柱，需先用高比例水相冲洗，再用高比例有机相冲洗，然后高比例有机相保存。需要注意清洗时，将流速设置为低于方法流速，长时间冲洗比多次冲洗的效果好。
 

　　4、利用固相萃取(Strata-X/Cleanert SPE产品)等样品制备技术或配件(Phenex/Clarinert针头式过滤器)，尽可能减少进入系统和色谱柱上的污染物。
 

　　5、不要让色谱柱过载，进样合适的样品浓度和体积。
 

　　6、记录压力基线，记录新色谱柱初始压力，便于后续对比判断。
 

　　下面来总结一下：
 

　　色谱柱压力过高的一般排查顺序为，先排查流动相，再连接两通排查仪器及系统压力，最后排查保护柱及色谱柱，同时需要查看温度及流速的设置以及是否色谱柱规格与仪器压力上限不合适的情况。若自行处理无效，建议联系仪器或色谱柱厂家寻求技术支持。